Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中迅速扩展

从第一次单单现胰脏自身抗体到单单现1HG白血病医学患者的令人满意叛将在儿童中后期就有不错的描述，多个胰脏自身抗体无患者的儿童中所有70%在血浆转换后10年内患上白血病，而随访15年的儿童这一比例缩减到84%。比起之下，占医学1HG白血病一半以上的HG1HG白血病的发作机制还从未得到应有的研究成果。

越来越多的人开始可用分期种系统来定义1HG白血病的令人满意：个体在单单现多种胰脏自身抗体时带入第1收尾，单单现血糖异常时带入第2收尾，单单现患者时带入第3收尾。一些多发胰脏自身抗体无患者的个体，在1期和2期，令人满意较快，并发展为发作的1HG白血病。我们之前描述了一分组在首次探测到多种胰脏自身抗体样本后数10年无白血病的近于快令人满意者，这分组病症人数少，但特征非常明确。随后，我们发掘出胰脏自身复合物特异性CD8+T巨噬细胞反应在令人满意平稳的病症中所大体不存在，但在现收尾发作和经常性存在的白血病病症中所很较易探测到。这可能暗示，与令人满意病症比起，这些病症自身免疫反应的调节增强。

现代研究成果暗示，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量情况下，但白血病病症存在一些功能性缺陷，其中所包括对IL-2的反应能力降低。此外，白血病病症中所的振荡CD4+T巨噬细胞可能对调节增添抵抗性，体现为振荡T巨噬细胞的抑制作用移向，自然造成的Treg和活体造成的抑止Treg，以及复合物历程的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应移向。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群近于平稳令人满意者中所的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以年轻人为基础的平行研究成果，在21岁以下住院的病症血亲中所检查1HG白血病的险恶因素。我们之前描述了经常性平稳令人满意者的特征，他们维持多重胰脏自身抗体无患者大约10年，但从未单单现白血病的医学患者，快性或非开展性自身免疫。随后，10名继续维持无白血病并愿意提供大量血液循环样本的平稳令人满意者纳入T和B巨噬细胞功能性系统性。在目前的研究成果中所，8名快令人满意者(SP分组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身抗体无患者。所有的参与者都处于1HG白血病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗体对某些复合物的无患者反应，然而，一名病症已经处于2期数6年，但从未单单现医学患者，一名病症被诊断为白血病，该受试者72岁，在通过观察验证样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中所对该ADP开展了另行评核。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采行多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞抑制作用试验评核ADP中所Treg的频带、表观和功能性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和重归)开展无统筹聚类系统性，评核Treg表观。

结果：与保健ADP比起，来自快令人满意体的清醒CD4+T巨噬细胞的统筹聚类结果显示，触发的清醒CD4+ Treg频带缩减，与糖皮质激素抑止的TNFR相关抗原(GITR)暗示缩减有关。一名HbA1c升高的病症与令人满意平稳者和匹配的对照分组比起，Treg谱相同。功能性系统性暗示，与保健ADP比起，来自平稳令人满意体的Treg介导的CD4+振荡T巨噬细胞抑制作用明显受损。体现为对振荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134暗示的抑制作用缩减。

绘出1 深入的表观系统性结果显示，CD4+Treg亚HG在快令人满意表头中所缩减。由FlowSOM生成的Treg房，涌进在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物暗示核对单单10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个数据流亦然一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在数据流分组周围上色。每个数据流中所的点心绘出说明单个标识的暗示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以结果显示整体标识暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起之下同位素为每个metacluster箱内两条路线绘出(同位素> 0.05%)未确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。红色格子亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 可用CITRUS的预测模HG证实，Treg频带的缩减是令人满意平稳的标志。分级制度旁路(a - f)和柑桔系统性(g-k)比起SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的民族特色绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示开展分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)分组以及ADPSP 606(红色)中所CD25+ cd127的频带摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路空集的箱内两条路线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突单单的簇被识别为SP和HD表头彼此之间的不同。(j)箱内两条路线绘出结果显示了在SP(斑点)和HD(灰点)分组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起之下同位素(比例)。(k)控制点结果显示每个簇的表观(粉红色)和Treg标识比起之下暗示与取材暗示(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面恰巧，存储器Treg_4。取材与所有其他簇中所标识的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

绘出3 与保健献血者比起，令人满意平稳者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个暗示标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的暗示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示控制点(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(红色)所有ADP包括，p< 0.05(浅蓝色)ADPSP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，从分级制度旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)串联，结果显示控制点(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

绘出4 来自平稳令人满意的CD4+ treg巨噬细胞操纵振荡CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP分组用浅蓝色的两条路线和格子说明，HD分组用紫色的两条路线和格子说明，红色的两条路线/格子说明ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠游离巨噬细胞，培植3当晚开展流式巨噬细胞术探测。(a-d)与CD4+应答者比起之下应的treg培植(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。可用无患者对照(触发的响应巨噬细胞不含treg)计算抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

绘出5 振荡CD4+T巨噬细胞对平稳令人满意的T巨噬细胞游离的抑制作用更脆弱。SP分组用浅蓝色的两条路线和格子说明，HD分组用紫色的两条路线和格子说明，红色的两条路线/格子说明ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠游离巨噬细胞，培植3当晚开展流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用调升(b)。(c,d) CD25抑制作用调升(c)和CD134抑制作用调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

论证：我们证明了的论证是，来自平稳令人满意子的游离清醒CD4+Treg在GITR暗示中所得到了扩展和丰富，强调了促使研究成果Treg在1HG白血病风险个体中所的异质性的必要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28